Cápsidas vacías del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo como plataforma para la inducción de respuesta humoral neutralizante y protectora frente a epítopos B heterólogos

Resum

Las VLPs (virus-like particles) son ensamblados macromoleculares constituidos por proteínas estructurales virales, que carecen de material genético y pueden someterse a modificación química o mediante ingeniería genética, para ser utilizadas como plataformas de presentación multimérica de antígenos foráneos. En esta tesis se describe la generación y caracterización de VLPs quiméricas derivadas del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo (RHDV) incorporando epítopos B heterólogos. El virus RHDV es el prototipo del género Lagovirus, perteneciente a la familia Caliciviridae. Posee una cápsida formada por 180 copias de la proteína estructural (VP60). Con el fin de evaluar la capacidad de las VLPs quiméricas de RHDV para inducir respuesta humoral específica y protectora frente a antígenos foráneos, seleccionamos dos epítopos B diferentes: un epítopo neutralizante, derivado de la cápsida del calicivirus felino (FCV), recientemente identificado por nuestro grupo, y un epítopo muy bien caracterizado correspondiente al dominio extracelular de la proteína M2 del virus de la gripe (M2e). Se obtuvieron VLPs quiméricas de RHDV con epítopos heterólogos insertados en tres localizaciones distintas de la proteínaVP60 y en diferente número de copias por sitio de inserción. La inmunogenicidad de las VLPs quiméricas se evaluó en el modelo murino. Los resultados obtenidos indicaron que las VLPs quiméricas de RHDV son capaces de inducir respuesta humoral específica y protectora frente a los epítopos B foráneos, demostrada tanto por la neutralización in vitro, como por la protección in vivo inducida frente a un desafío viral letal. Además, mediante la realización de ensayos de PEPSCAN, en esta tesis se han identificado tres regiones lineales inmunodominantes en el subdominio P2 de la proteína VP60. Una de dichas regiones presenta propiedades estructurales potencialmente adecuadas para constituir un nuevo sitio de inserción de epítopos B heterólogos. Los resultados presentados demuestran: (i) que se pueden insertar epítopos B foráneos en al menos tres localizaciones diferentes, incluso simultáneamente, sin afectar la capacidad de la proteína VP60 de autoensamblarse en VLPs, (ii) que las VLPs de RHDV toleran la inserción de al menos tres copias en tándem de un epítopo foráneo (62 aa) en el bucle expuesto L1, dos copias (42 aa) en el extremo N-terminal o una copia (22 aa) en el extremo C-terminal, (iii) que el subdominio P2 contiene tres sitios lineales inmunodominantes conservados. En conjunto, los resultados obtenidos en esta tesis amplían el potencial de las VLPs de RHDV como plataforma para el desarrollo de nuevas vacunas, demostrando su capacidad para inducir respuestas humorales potentes y protectoras frente a epítopos B heterólogos insertos en ellas.