Analisis cinetico y estructural del desarrollo interfasico en poblaciones meristematicas

Resumo

En el presente trabajose han analizado diversos aspectos de la interfase de poblaciones meristemáticas de Allium cepa desarrolladas en cultivo hidropónico a 25.C. La citología tanto cualitativa como cuantitativa ha sido nuestro enfoque metodológico, utilizando, entre otros medios la microespectrofotometría y el análisis de imagen para la realización de cuantificaciones morfo y densitométricas, y la microscopía laser confocal para la localización espacial de fluorocromos. Se ha analizado la evolución del contenido en DNA a lo largo de la interfase y su relación con el patrón de condensación de la cromatina en poblaciones meristemáticas sincronizadas por selección. La proporción de cromatina condensada se incrementa durante el G1 medio, seguido de un rápido descenso que alcanza valroes mínimos en el tránsito G1-S y se mantiene durante gran parte del S. Coincidiendo con el final de la replicación se produce un nuevo incremento en la proporción de cromatina condensada que se continúa a lo largo del periodo G2. Estudios comparativos demuestran que, tras elegir la dosis y el tiempo de incubación adecudos, la incorporación de bromodesoxiunridina (BrdU) en el DNA nuclear y su detección inmunocitoquímica se convierte en un buen sustituto de la 3H-TdR para análisis cinéticos. La técnica Feulgen-inmunoperoxidasa para la detección de la BrdU incorporada en el DNA nuclear desarrollada por nosotros ha demostrado ser una herramienta de gran utilidad para el estudio del ciclo celular, ya que permite la adscripción inequívoca de las células en los diferentes compartimentos de la interfase. Distintos enfoques experimentales nos han permitido establecer tres patrones morfológicos de replicación nuclear - S1, S2 y S3 - que corresponden a periodos sucesivos de la fase S. El patrón S1 representa el encendido de la fase S y se extiende alrededor de L min., a continuación aparece el patrón S2 que representa el subper